第281章 变异感染者DNA提取(第2页)
钟教授迅速对其进行检测,很担心其中的dnA降解掉。
血液干燥后,其中的dnA会逐渐降解,从而减少提取成功的可能性。一般而言,血液干燥后的dnA保存时间在几天到几周之间,不同的环境条件会产生不同的影响。
而且环境因素对血液中dnA的保存影响也很大,高温、湿度和紫外线等环境因素会加速dnA的降解,从而影响提取成功率。
好在这感染者的血液本就漆黑,干涸之后活性保留反而比人类的血液活性保留的时间更长。
钟教授将提取任务交给了其中一名研究员,研究员迅速的进行着准备工作。
准备工作如下:
1. 第一次使用时,在Buffer w2 concentrate 和Buffer w1B concentrate 中按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇。
2. Buffer w2(12x96 试剂盒)配制:在提供的500 ml 空瓶中加入15 ml 10xBuffer w2,135 ml 去离子水和350 ml 乙醇,可用100%无水乙醇或95%乙醇。
3. 根据瓶上标签将蛋白酶k 溶解于Buffer pk 中,请勿旋涡振荡。
4. 准备70c温浴。
5. 使用前检查Buffer BL 是否有沉淀析出,若出现沉淀,请于70c温浴加热至沉淀完全溶解后再使用。
完成试剂准备工作之后,在钟教授的首肯之下,研究员开始进行dnA的提取。
具体操作步骤如下:
1. 向96 圆孔板的每孔中加入20 ul 蛋白酶k。
2. 加200 ul 抗凝全血到96 圆孔板中。
~undefined 若全血样品体积少于200 ul,用pBs 补充到200 ul。
~undefined 若样品为鸟类血,样品用量须低于10 ul。
~undefined 若需得到rnA-free 的基因组dnA,在步骤3 加入Buffer BL 前加入dnase-free 的rnase A(20 mg/ ml) 。
3. 加200 ul Buffer BL ,注意不要打湿每孔的边缘,用96 圆孔硅胶片密封各孔。
4. 用力混合30 s。
5. 3000 rpm 简短离心使96 圆孔硅胶片上的溶液到96圆孔板内。启动离心机,当速度达到3000rpm后即停止。